胞養(yang) 好了，但是沒時間做後麵的實驗了，這時怎麽(me) 辦？將細胞收下來，直接凍在-80℃冰箱，是大多數人的常規操作。因為(wei) -80℃冰箱是大多數蛋白研究人員的安全感來源，但是把細胞凍存就保險了嗎？在凍存過程中，細胞發生了哪些變化呢？凍存過的細胞還可以提總蛋白嗎？可以做磷酸化研究嗎？可以分離胞質胞核嗎？可以分離細胞亞(ya) 結構嗎？
 凍存過程中，細胞發生了哪些變化？ 0℃至-60℃

細胞被凍存在-80℃冰箱後，隨著溫度的下降，在0℃到-60℃之間會(hui) 形成大量冰晶，胞外的冰晶會(hui) 導致細胞發生機械損傷(shang) ，胞內(nei) 的冰晶則會(hui) 破壞細胞膜和細胞器，引起細胞死亡。細胞器被破壞，細胞器內(nei) 的蛋白酶釋放從(cong) 而引起蛋白降解。

細胞凍融過程損傷(shang) 機製

10℃至-16℃

當溫度從(cong) 10℃降溫至-16℃的過程中，細胞處於(yu) 過冷狀態，冰晶自發形成，膜脂脫水從(cong) 液相變為(wei) 固相，膜滲透率改變，造成冷休克。冰晶損傷(shang) 和冷休克都會(hui) 對細胞成為(wei) 致命殺手。複溫過程中，胞內(nei) 外冰晶容易發生再結晶形成更大的冰晶，高濃度的電解質也會(hui) 導致溶質損傷(shang) ，造成致命細胞傷(shang) 害。複溫時造成的細胞損傷(shang) 非常快，往往在極短的時間內(nei) 發生。

0℃至-196℃再至0℃

Nature子刊刊登的細胞樣品從(cong) 0℃到-196℃再到0℃，細胞變化過程。可見細胞在冷凍和解凍過程中，溫度變化對細胞施加巨大壓力，由此可能導致蛋白變性並影響高級結構，例如卵母細胞經過凍存後，微管和減數分裂紡錘體(ti) 的結構可能發生變化，致使受精後染色體(ti) 分離出現異常。

凍存的細胞樣品還能用嗎？還能提取蛋白做實驗嗎？ 總蛋白提取能做嗎？ 

凍存的細胞可以用於(yu) 總蛋白提取，但是某些蛋白可能在凍融過程中已經降解或高級結構發生改變，最終影響下遊實驗的檢測。故做細胞凋亡檢測或磷酸化蛋白檢測，酶活性檢測等實驗，不建議使用凍存的細胞樣品。推薦細胞收集後盡快進行蛋白提取，將蛋白樣品凍存於(yu) -80℃。Invent柱式法蛋白提取工具（Cat#SD-001/SN-002），讓來不及做蛋白提取成為(wei) 曆史，僅(jin) 需在細胞樣品中加入裂解液，過柱，1分鍾即可完成變性蛋白提取。迅速完成蛋白提取，再不用為(wei) 細胞凍存問題而煩惱