動物細胞培養(yang) 的培養(yang) 條件
1、無菌、無毒的環境:對培養(yang) 液和所有培養(yang) 用具進行無菌處理,通常還要在培養(yang) 液中加入一定量的的抗生素,以防被汙染。此外應定期更換培養(yang) 液,以便清除代謝產(chan) 物防止細胞代謝產(chan) 物累積對細胞自身產(chan) 生危害。
2、營養(yang) 物質:無機物(無機鹽、微量元素等),有機物(糖、氨基酸、促生長因子等)
3、血清和血漿(提供細胞生長必須的營養(yang) 成份)
4、溫度和pH(36.5±0.5℃,7.2~7.4)
5、氣體(ti) 環境(95%的空氣+5%CO₂的混合氣體(ti) )
6、其中5%CO₂氣體(ti) 是為(wei) 保持培養(yang) 液的pH穩定
動物細胞培養(yang) 的培養(yang) 步驟
注:所有步驟應在無菌無毒的超淨工作台進行。胰蛋白酶處理時間不宜過長。
取離體(ti) 的動物組織,器官或細胞,剪碎並加入胰蛋白酶分解成單個(ge) 細胞,配置形成細胞懸液。
製備動物細胞培養(yang) 液體(ti) 培養(yang) 基(需加入血清,保證無菌無毒),將細胞接種至培養(yang) 基,放入二氧化碳培養(yang) 箱中進行初代培養(yang) 。
當細胞增殖達到一定程度,出現接觸抑製現象時,用胰蛋白酶再次處理,並用細胞懸液吹打貼壁生長的細胞。進行細胞計數。
依照計數結果,分瓶培養(yang) ,進行傳(chuan) 代培養(yang) 。獲得細胞係或細胞株。
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