NIBSC 百日咳杆菌抗FHA血清(標準品)

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非 WHO 參考材料

百日咳博德特氏菌抗 FHA 血清（綿羊）

NIBSC 97/564

本材料不適用於(yu) 體(ti) 外診斷。

1. 預期用途

在綿羊中製備抗血清以純化百日咳博德特氏菌絲(si) 狀血凝素並用於(yu) 無細胞百日咳疫苗的對照測試。

2. 注意

該製劑不適用於(yu) 人類食物鏈中的人類或動物。

該材料不是人或牛來源。與(yu) 所有生物來源的材料一樣，這種製劑應被視為(wei) 對健康有潛在危害。應根據您自己實驗室的安全程序使用和丟(diu) 棄它。此類安全程序應包括戴防護手套和避免產(chan) 生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時應小心謹慎，以免割傷(shang) 。

NIBSC 97/564 百日咳杆菌抗FHA血清(標準品)

3. 單元

沒有為(wei) 該材料分配單元

4. 內(nei) 容

生物材料原產(chan) 國：英國。

每個(ge) 小瓶含有 1.0ml 0.01M 磷酸鉀 pH7.2、0.5M NaCl 溶液的凍幹殘餘(yu) 物，該溶液含有通過用 50% 飽和硫酸銨沉澱抗百日咳杆菌 FHA 血清而純化的免疫球蛋白。

5. 存儲(chu)

未開封的小瓶應儲(chu) 存在 -20°C。

請注意：由於(yu) 凍幹材料固有的穩定性，NIBSC 可能會(hui) 在環境溫度下運輸這些材料。

6. 開瓶指南

樣品瓶有一個(ge) “上翻式"圓形瓶蓋。無論是在瓶蓋上還是在小瓶的套環上，都標有撬開瓶蓋的位置。這暴露了塞子的一個(ge) 區域，通過該區域重構可以使用皮下注射針頭和注射器提取製劑。如果首先 使用移液器，則使用鑷子等*取下金屬項圈，戴上合適的手套注意避免割傷(shang) 。取下塞子以便進入。應注意防止內(nei) 容物丟(diu) 失。

NIBSC 97/564 百日咳杆菌抗FHA血清(標準品)

7. 材料的使用

出於(yu) 實用目的，每個(ge) 小瓶都含有相同數量的抗血清。每個(ge) 小瓶的全部內(nei) 容物應*重新懸浮在準確測量量的水或緩衝(chong) 溶液中。不應試圖權衡其中的比例凍幹粉。

如果不立即使用，建議將懸浮液儲(chu) 存在 –20°C 或以下。應避免反複凍融。小瓶不含抑菌劑，不應假定製劑是無菌的。

用於(yu) 綿羊免疫的抗原是純化的絲(si) 狀血凝素，它是由比利時 Rixensart 的 SmithKline Beecham Pharmaceuticals 通過 M Duchene 博士的斡旋慷慨捐贈的。用弗氏*佐劑 (FCA) 乳化的磷酸鹽緩衝(chong) 鹽水 (PBS) 中的一劑 250µg 抗原 (PBS) 以 2ml 的總體(ti) 積肌肉注射給綿羊，然後每隔 4 周注射三劑 150µg 抗原。最後一次注射後 2 周進行終末放血。通過用50％飽和硫酸銨沉澱免疫球蛋白來部分純化血清。

將沉澱物重新懸浮在PBS中並將懸浮液以1ml等分試樣分配到小瓶中並凍幹。通過ELISA檢查抗血清對同源抗原的反應性和與(yu) 其他百日咳抗原的交叉反應。在 1/10,000 的稀釋度下，抗血清給出了同源滴度，並且與(yu) 其他百日咳抗原沒有交叉反應。

酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細胞，消化蛋白，然後用酚和酚-氯DNA大小為(wei) 100-150kb
二.甲酰胺解聚法：破碎細胞同上，然後用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與(yu) DNA的結合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細胞，將裂解物鋪於(yu) 乙醇上，然後用帶鉤或U型玻璃棒在界麵輕攪，DNA沉澱液繞於(yu) 玻棒。生成DNA約80kb。
四.異丙醇沉澱法：基本同1法，僅(jin) 用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態）
五.表麵活性劑快速製備法：用Triton X-100A或NP40表麵活性劑破碎細胞，然後用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉澱或透析。
六.加熱法快速製備：加熱96℃-100℃，五分鍾，然後離心後取上清，可用於(yu) PCR反應。
七.堿變性快速製備：先用NaOH作用20分鍾，再加HCI中和，離心後取上清，含少量DNA。